Leche rápida 96Wells/Kit ISO9001 de la detección de ELISA Milk Test Kit For de la melamina

Kit de prueba ELISA de melamina para leche de detección 96Pocillos/Kit ISO9001

 

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo indirecto para la detección de melamina en la muestra.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente en las tiras de micropocillos.La melamina de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las tiras de micropocillos compiten por los anticuerpos anti-melamina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra de prueba tiene una correlación negativa con la concentración de melamina en la muestra.Este valor se compara con la curva patrón y posteriormente se obtiene la concentración de Melamina.

 

 

2.Kit de prueba de lecheComponentes

1	Tiras de micropocillos	12 tiras con 8 extraíbles pozos cada uno
2	Solución estándar 6× (1 ml cada una)	0ppb	0.5ppb
		1.5ppb	4.5ppb
		13,5ppb	40.5ppb
3	Adición de solución estándar	1ppm	1ml
4	Conjugado enzimático	7ml	gorra roja
5	solución de trabajo de anticuerpos	7ml	gorra azul
6	Sustrato A	7ml	gorra blanca
7	SustratoB	7ml	gorra negra
8	Detener la solución	7ml	gorra amarilla
9	10x muestra extrayendo una solución	50ml	tapa transparente
10	Solución B de extracción de muestra 20x	50ml	gorra azul
11	Tampón de lavado concentrado 20×	15ml	gorra blanca

 

3. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.5ppb

Temperatura de la incubadora: 25 ℃

Tiempo de incubadora: 30min~15min

Límite de detección:

Mantequilla, dulces, queso 10ppb

Tasa de reacción cruzada:

Melamina 100%

Índice de recuperación:

Mantequilla 90±25%

Caramelo, queso 95±25%

 

4. Materiales requeridos pero no provistos

1) Equipos: lector de microplacas, impresora, vórtice, centrífuga, pipetas de medición, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), baño de agua de 70 ℃;

2) Micropipetas: monocanal 20~200 µL, 100~1000 µL;y multicanal 30～300 μl;

 

5. Pretratamiento de la muestra

Instrucciones (los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1) Solo las puntas desechables pueden usarse para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución

1) Muestra de extracción de una solución

Diluya la solución de extracción de muestra 10x con agua desionizada a 1:9;

2) Solución B de extracción de muestra

Diluya la solución B de extracción de muestra 20x con agua desionizada a 1:19.

 

5.1 Mantequilla

1) Tome 1 g de mantequilla fresca en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 5 ml de solución de extracción de muestra A, incube en un baño de agua a 70 ℃ durante 5 min, agite en el vórtex durante 5 min, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min;

2) Tome 50 ul de líquido de capa inferior para su análisis

Veces de dilución de muestra: 5

5.2 Dulces, queso

1) Tome 1 g de muestra fresca en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 5 ml de solución de extracción de muestra B, incube en un baño de agua a 70 ℃ durante 5 minutos, agite en el vórtex durante 5 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 minutos;

2) Tome 50 ul de líquido de capa inferior para su análisis

Veces de dilución de muestra: 5

 

6. Procedimientos ELISA

6.1 Instrucciones

1 Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃).

2 Regrese todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.

3 La reproducibilidad del análisis ELISA, en gran medida, depende de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4 Para la incubación a temperatura constante, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz, y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de operación

1)Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de su uso;coloque las tiras de micropocillos requeridas en marcos de placas.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, almacenada a 2-8 ℃, no congelada.

2)Preparación de la solución: diluya 15 mL del tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 300 mL para su uso;

3)Numeración: numere los micropocillos de acuerdo con las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.

4)Agregue 50 µL de la muestra/solución estándar para separar los pozos duplicados, luego agregue 50 µL del conjugado enzimático, luego agregue 50 µL de la solución de trabajo de anticuerpos a cada pozo, agite adecuadamente, selle la microplaca con la membrana protectora e incube a 25 ℃ durante 30 min;

5)Saque el líquido de los pocillos, lave la microplaca con el tampón de lavado diluido a 250 µL/pocillo durante 5-6 veces.Empape cada vez el pocillo con el tampón de lavado diluido durante 15-30 segundos y luego agite para secar sobre papel absorbente (si quedan burbujas después del aleteo, córtelas con las puntas limpias).

6)Coloración: agregue 50 µL del sustrato A, luego 50 µL del sustrato B en cada pocillo.Mezcle suavemente agitando la placa manualmente e incube a 25 ℃ durante 15 minutos en la oscuridad para la coloración;

7)Determinación: agregue 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor OD en la longitud de onda dual 450/630nm en 5 min).

 

7. Juicio de resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de melamina.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor promedio de OD de la muestra de prueba con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de la DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de la DO de las soluciones estándar es: 2,043 para 0 ppb, 1,604 para 0,5 ppb, 1,101 para 1,5 ppb, 0,512 para 4,5 ppb, 0,161 para 13,5 ppb , 0,055 para 40,5 ppb, por lo que el rango de concentración de la muestraⅠ es de 4,5 a 13,5 ppb y el de la muestra Ⅱ es de 1,5 a 4,5 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia equivalen al porcentaje del valor promedio de OD (B) de la muestra de prueba y la solución estándar dividido por el valor de OD (B0) de la primera solución estándar (0 estándar) y luego multiplicado por 100 %, eso es

 

Porcentaje del valor de absorbancia =	B	×100%
	B0

 

B: el valor promedio de OD (pocillos dobles) de la muestra de prueba o la solución estándar

B0: el valor promedio de OD de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores semilogarítmicos de las soluciones estándar de melamina (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de prueba de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el pliegue de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Melamina en la muestra.

 

8. Precauciones

1)La temperatura ambiente por debajo de 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras de prueba que no regresan a la temperatura ambiente (20-25 ℃) conducirá a un valor de OD estándar más bajo.

2)La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen las curvas estándar no lineales y la reproducibilidad no deseada;Así que continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.

3)Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad indeseable.

4)La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.

5)No utilice el kit después de su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de OD.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso.

6)Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.

7)Deseche la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.

8)La temperatura de reacción óptima es de 25 ℃, y las temperaturas demasiado altas o bajas darán como resultado cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

 

9. Conservación y fecha de caducidad

Almacenamiento: almacenado a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad: 12 meses;la fecha de producción está en la caja

Nota: Si el paquete de vacío de la microplaca tiene fugas, aún es válido para usar, no afecta el resultado de la prueba, relájese para usarlo.

 

 

P1: ¿Cuánto tiempo tardará en enviarse?
A1: generalmente se envía dentro de los 7 días hábiles.

 

P2: ¿Admite OEM/ODM?
A2: puede ser compatible.Podemos personalizar según sus necesidades específicas y cantidades específicas.

 

P3: ¿Cómo le está yendo a su fábrica en términos de control de calidad?
A3: tenemos la certificación ISO9001 y la certificación ISO13485, hasta ahora todo el proceso de producción, tenemos reglas estándar, cumplimos con el comportamiento y las leyes gubernamentales relevantes.

 

P4: ¿Está garantizado el servicio posventa?
A4: Brindamos un servicio posventa técnico profesional en línea.Si el producto falla durante el experimento, podemos proporcionar
orientación personalizada a través de teléfono, video y otras formas.

 

P5: ¿Cuál es la cantidad mínima de pedido?
A5: 1 juego.

 

Q6: ¿Cuál es el método de envío?
A6: Se puede enviar por expreso (FEDEX, UPS, DHL, EMS, etc.) o por aire y tierra. Confirme con nosotros antes de realizar un pedido.