Anticuerpo del nitrofurano AHD ELISA Food Rapid Test Kit para la sensibilidad 0.04ppb 96Wells/Kit de la leche

Nitrofurano AHD ELISA Food Safety Test Kit para la sensibilidad 0.04ppb 96Wells/Kit de la leche

 

1. Principio del nitrofurano AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Aminohydantion (AHD) en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Aminohydantion (AHD) en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis-AHD. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el AHD en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de AHD se obtiene posteriormente.

 

2. Especificaciones técnicas del nitrofurano AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Sensibilidad: 0.04ppb

Temperatura de la incubación: 25℃

Tiempo de la incubación: 30min~15min

Tejido del límite de detección, huevo, miel: 0.1ppb

Tarifa del reacción cruzado

AHD 100%

AMOZ < 0="">

AOZ < 0="">

SEM < 0="">

Tarifa de recuperación

Tejido, huevo el 95±25%

Miel el 75±25%

 

3. Componentes

 

1	Tiras micro-bien	12 tiras con 8 desprendibles pozos por cada uno
2	solución estándar 6× (1 ml cada uno)	0ppb	0.04ppb
		0.12ppb	0.36ppb
		1.08ppb	3.24ppb
3	Conjugación de la enzima	7ml	casquillo rojo
4	Solución de funcionamiento del anticuerpo	7ml	casquillo azul
5	Substrato A	7ml	casquillo blanco
6	SubstrateB	7ml	casquillo negro
7	Pare la solución	7ml	casquillo amarillo
8	20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba	40ml	casquillo blanco
9	2× concentró la redisolución de la solución	50ml	casquillo transparente
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	casquillo negro

 

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

 

1) Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, la balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, baño de agua;

2) Micropipettors: 20-200µL monocanal, 100-1000µL, y 30~300µl de varios canales;

3) Reactivo: NaOH, acetato de etilo, n-hexano, HCI (36,5% aproximados), K2HPO4·3H2O

 

5. Tratamiento previo de la muestra

 

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1) Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

) 0,1 M K2HPO4: disuelva 11.4g K2HPO4·3H2O en agua desionizada a 500mL.

b) 1 M HCl: disuelva 8.6mL HCI (36,5% aproximados) en agua desionizada a 100mL.

c) NaOH de 1 M: disuelva NaOH 4g en agua desionizada a 100mL.

d) el 2×concentrated que redisuelve la solución se diluye con agua desionizada en el 1:1 (1mL concentró la redisolución de la solución + 1 ml de agua desionizada), usado para la redisolución de la muestra.

 

5,1 preparación de las muestras

a) Tejido, huevo

1) Pese 1± 0.05g de la muestra homogeneizada, añada 4mL del agua destilada, 0.5mL 1 M HCI y 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, sacuden correctamente para 2min;.

2) Incube el ℃ at37 durante la noche (horas approx16) o incube at56℃ por el baño de agua (2 horas).

3) Añada 5mL los 0.1M K2HPO4, NaOH y 6mL el acetato de etilo a cada tubo, sacudida de 0.4mL el 1M para 30s.

4) Centrifugadora en 4000r/min antedicho en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10min (si hay emulsificación o la capa del acetato de etilo no está bastante para 3ml, no incuba la muestra en el baño de agua 80℃ para 10min y la centrifugadora en varias ocasiones; o aumente la velocidad y prolongue la época de la centrifugadora).

5) Transferencia 3mL de la capa del acetato de etilo en un nuevo tubo centrífugo y evaporarse al estado seco por el nitrógeno o el aire en 50℃.

6) Disuelva los residuos secos en el n-hexano 2mL, añada 1mL de la solución de redisolución diluida, mezcla correctamente por 30 segundos, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para el minuto 10; Quite la fase del n-hexano de la para arriba-capa (si hay emulsificación, después de quitar fase del n-hexano de la para arriba-capa, incuba la muestra en el baño de agua 70℃ para 10-20min, la centrifuga en varias ocasiones).

7) Tome a 50 el µL del más bajo para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 2

b) Miel

1) Pese 2± 0.05g de la muestra homogeneizada (miel), añada 4mL del agua destilada, 0.5mL 1 M HCI y 100 el µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, sacude correctamente para 2min;.

2) Incube el ℃ at37 durante la noche (horas approx16) o incube at56℃ por el baño de agua (2 horas).

3) Añada 5mL los 0.1M K2HPO4, NaOH y 6mL el acetato de etilo a cada tubo, sacudida de 0.4mL el 1M para 30s.

4) Centrifugadora en 4000r/min antedicho en la temperatura ambiente (20-25℃) para 10min (si hay emulsificación o la capa del acetato de etilo no está bastante para 3ml, no incuba la muestra en el baño de agua 80℃ para 10min y la centrifugadora en varias ocasiones; o aumente la velocidad y prolongue la época de la centrifugadora).

5) Transferencia 3mL de la capa del acetato de etilo en un nuevo tubo centrífugo y evaporarse al estado seco por el nitrógeno o el aire en el ℃ 50.

6) Disuelva los residuos secos en el n-hexano 2mL, añada 1mL de la solución de redisolución diluida, mezcla correctamente por 30 segundos, centrifugadora en sobre 4000r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para el minuto 10; Quite la fase del n-hexano de la para arriba-capa (si hay emulsificación, después de quitar fase del n-hexano de la para arriba-capa, incuba la muestra en el baño de agua 70℃ para 10-20min, la centrifuga en varias ocasiones).

7) Tome a 50 el µL del más bajo para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 1

 

6. Procedimientos de ELISA

 

6,1 instrucciones

1) Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;

3) La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;

4) Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

 

6,2 procedimientos de la operación

1) Traiga el equipo de la prueba a la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30min, observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar, ponga las tiras micro-bien requeridas en marcos de la placa. Reselló el microplate inusitado, tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

2) Preparación de la solución: 40mL diluído del almacenador intermediario que se lava concentrado 20 × con agua desionizada en el 1:19 (almacenador intermediario que se lava concentrado × de 1 parte 20 + 19 porciones de agua desionizada). O prepárese según las necesidades.

3) Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces, registran sus posiciones.

4) Añada 50µL de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados; añada la conjugación entonces 50µL de la solución de funcionamiento del anticuerpo en cada pozo, mezcla de la enzima 50ul suavemente sacudiendo la placa manualmente. Selle el microplate con la membrana de la cubierta, andincubate en el ℃ 25 para 30min.

5) Vierta el líquido fuera del microwell, aleta para secarse en el papel absorbente, añada 250µL/well del almacenador intermediario que se lava para lavar el microplate por 15-30s, después saque y agite para secarse con el papel absorbente, repita 4-5 veces. (Si hay las burbujas después de agitar, las cortó con las extremidades limpias).

6) Coloración: añada 50µL del substrato A y entonces 50µL del substrato B en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, después incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración.

7) Determinación: añada 50µL del paran la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450nm para determinar el valor del OD de cada pozo. (Recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630nm en el plazo de 5 minutos).

 

7. Juicio del resultado

 

Hay dos métodos para juzgar los resultados: primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de AHD.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de comparar el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1.0ppb, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.04ppb, 1,415 para 0.12ppb, 0,74 para 0.36ppb, 0,313 para 1.08ppb, 0,155 para 3.24ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 1,08 a 3.24ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,12 a 0.36ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción se obtienen para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B0) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Porcentaje del valor de la absorción =	B	el ×100%
	B0

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

Valor del OD de la media de B0-the de la solución estándar 0ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de la solución estándar y los valores del semilogarithm de la solución estándar de AHD (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de AHD en la muestra.

 

8. Precauciones

 

1) La temperatura ambiente es más baja que 25℃ o la temperatura y la muestra el reactivo no se vuelven a la temperatura ambiente (20-25℃), que hará el valor estándar del OD disminuir.

2) Durante el proceso que se lava, la sequedad del microplate será acompañada por la ausencia de linealidad de la curva estándar y de la reproductibilidad insatisfactoria; por lo tanto, proceda al paso siguiente inmediatamente después del lavado.

3) Mézclese bien, si no habrá reproductibilidad pobre.

4) Pare la solución es solución ácida sulfúrica de 2 M, evitan el contacto con la piel.

5) No utilice el equipo más allá de la fecha de caducidad. El uso de reactivo diluidos o adulterados del equipo puede dar lugar a cambios en valores del OD de la sensibilidad y de la detección. No substituya los reactivo en diversos lotes de equipos.

6) Reselle los microplates inusitados en bolsos autoadhesivos. Las soluciones estándar y los acopladores descoloridos son sensibles a la luz y no se pueden exponer directamente para encenderse.

7) Deseche cualquier solución de teñido cuyo color indique que la solución ha degradado. Un valor de la detección de menos de 0,5 para la solución estándar 1 (0 ppb) indica la degradación.

8) La temperatura óptima de la reacción es 25℃, y la sensibilidad de la detección y el valor del OD cambiarán si la temperatura es demasiado alta o demasiado baja.

 

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

 

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2 a 8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.

 

 

Q1: ¿Cuándo será enviado?
A1: Enviaremos las mercancías para usted cuanto antes en el plazo de 7 días laborables después de recibir el pago. (En caso de epidemia y de otros factores externos, puede haber retrasos en el envío)

 

Q2: ¿Apoya OEM/ODM?
A2: Puede ser apoyado, pero la cantidad específica necesita ser más de 100.000 pedazos para facilitar productos modificados para requisitos particulares.

 

Q3: ¿Cómo su fábrica está haciendo en términos de control de calidad?
A3: Hacemos ISO9001 e ISO13485 certificar por el estado. Nuestro proceso de producción está de acuerdo con el proceso estándar, que puede asegurarse de que la calidad de los productos sea óptima.

 

Q4: ¿Cómo proporcionan el servicio post-venta?
A4: Proporcionamos el servicio post-venta técnico en línea profesional. Podemos proveer de usted la dirección unívoca bajo la forma de vídeo, llamadas de teléfono, etc.

 

Q5: ¿Cuál es la forma de pago?
A5: Recibimos el pago por T/T.

 

Q6: ¿Cómo enviar?
A6: Obteniendo citas de nuestros muchos portadores cooperativos, elija la mejor manera de enviar para usted, o usted puede enviar según sus requisitos.