Sensibilidad 0.01ppb 96Wells/Kit del nitrofurano AOZ Kit Test ELISA For Fish Shrimp Honey

Nitrofurano AOZ ELISA Test Kit para el camarón Honey Sensitivity 0.01ppb 96Wells/Kit de los pescados

 

1. Principio

Esta fequipo rápido de la prueba de la seguridad del oodse basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de AOZ en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. Los AOZ en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis-AOZ. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el AOZ en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de AOZ se obtiene posteriormente.

2. Componentes

1	Tiras micro-bien	12 tiras con 8 desprendibles pozos por cada uno
2	solución estándar 6× (1mL cada uno)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	Conjugación de la enzima	7ml	casquillo rojo
4	Solución de funcionamiento del anticuerpo	7ml	casquillo azul
5	Substrato A	7ml	casquillo blanco
6	SubstrateB	7ml	casquillo negro
7	Pare la solución	7ml	casquillo amarillo
8	20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba	40ml	casquillo blanco
9	2× concentró la redisolución de la solución	50ml	casquillo transparente
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	casquillo negro

 

3. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.01ppb

Temperatura de la incubación: 25℃

Tiempo de la incubación: 30min~15min

Límite de detección

Tejido, huevo, miel: 0.05ppb

Tarifa del reacción cruzado

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

Tarifa de recuperación

Tejido, huevo el 95±25%

Miel el 85±23%

 

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

1) Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, la balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, baño de agua;

2) Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µl de varios canales 30~300;

3) Reactivo: NaOH, acetato de etilo, n-hexano, HCI (36,5% aproximados), K2HPO4·3H2O

 

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1) Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

1) 0,1 M K2HPO4: disuelva g 11,4 K2HPO4·3H2O en agua desionizada a 500mL.

2) 1 M HCl: disuelva 8.6mL HCI (36,5% aproximados) en agua desionizada a 100mL.

3) NaOH de 1 M: disuelva NaOH 4g en agua desionizada a 100mL.

4) el 2×concentrated que redisuelve la solución se diluye con agua desionizada en el 1:1 (1mL concentró la redisolución de la solución + del agua desionizada 1mL), usado para la redisolución de la muestra.

 

5,1 preparación de las muestras

a)Tejido, huevo

1) Pese 1± 0.05g de la muestra homogeneizada, añada 4mL del agua destilada, 0.5mL 1 M HCI y 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, sacuden correctamente para 2min;.

2) Incube at37℃ durante la noche (horas approx16) o incube at56℃ por el baño de agua (2 horas).

3) Añada 5mL los 0.1M K2HPO4, NaOH y 6mL el acetato de etilo a cada tubo, sacudida de 0.4mL el 1M para 30s.

4) Centrifugadora en 4000r/min antedicho en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10min (si hay emulsificación o la capa del acetato de etilo no está bastante para 3ml, no incuba la muestra en el baño de agua de 80 ℃ para 10min y la centrifugadora en varias ocasiones; o aumente la velocidad y prolongue la época de la centrifugadora).

5) Transferencia 3mL de la capa del acetato de etilo en un nuevo tubo centrífugo y evaporarse al estado seco por el nitrógeno o el aire en 50℃.

6) Disuelva los residuos secos en el n-hexano 2mL, añada 1mL de la solución de redisolución diluida, mezcla correctamente por 30 segundos, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para el minuto 10; Quite la fase del n-hexano de la para arriba-capa (si hay emulsificación, después de quitar fase del n-hexano de la para arriba-capa, incuba la muestra en el baño de agua de 70 ℃ para 10-20min, la centrifuga en varias ocasiones).

7) Tome a 50 el µL del más bajo para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 2

 

b) Miel

1) Pese 2± 0.05g de la muestra homogeneizada (miel), añada 4mL del agua destilada, 0.5mL 1 M HCI y 100 el µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, sacude correctamente para 2min;.

2) Incube at37℃ durante la noche (horas approx16) o incube at56℃ por el baño de agua (2 horas).

3) Añada 5mL los 0.1M K2HPO4, NaOH y 6mL el acetato de etilo a cada tubo, sacudida de 0.4mL el 1M para 30s.

4) Centrifugadora en 4000r/min antedicho en la temperatura ambiente (20-25℃) para 10min (si hay emulsificación o la capa del acetato de etilo no está bastante para 3ml, no incuba la muestra en el baño de agua de 80 ℃ para 10min y la centrifugadora en varias ocasiones; o aumente la velocidad y prolongue la época de la centrifugadora).

5) Transferencia 3mL de la capa del acetato de etilo en un nuevo tubo centrífugo y evaporarse al estado seco por el nitrógeno o el aire en el ℃ 50.

6) Disuelva los residuos secos en el n-hexano 2mL, añada 1mL de la solución de redisolución diluida, mezcla correctamente por 30 segundos, centrifugadora en sobre 4000r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para el minuto 10; Quite la fase del n-hexano de la para arriba-capa (si hay emulsificación, después de quitar fase del n-hexano de la para arriba-capa, incuba la muestra en el baño de agua de 70 ℃ para 10-20min, la centrifuga en varias ocasiones).

7) Tome a 50 el µL del más bajo para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 1

 

6. Procedimientos de ELISA

6,1 Instrucciones

1) Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;

3) La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;

4) Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

 

6,2 Procedimientos de la operación

1) Traiga el equipo de la prueba al minuto 30 de la temperatura ambiente (℃ 20-25) por lo menos, observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar, ponga las tiras micro-bien requeridas en marcos de la placa. Reselló el microplate inusitado, tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

2) Preparación de la solución: 40mL diluído del almacenador intermediario que se lava concentrado 20 × con agua desionizada en el 1:19 (almacenador intermediario que se lava concentrado × de 1 parte 20 + 19 porciones de agua desionizada). O prepárese según las necesidades.

3) Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces, registran sus posiciones.

4) Añada el µL 50 de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados; añada 50 que la enzima de la UL conjuga entonces el µL 50 de la solución de funcionamiento del anticuerpo en cada pozo, mezcla suavemente sacudiendo la placa manualmente. Selle el microplate con la membrana de la cubierta, andincubate en 25 el ℃ for30min.

5) Vierta el líquido fuera del microwell, aleta para secarse en el papel absorbente, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava para lavar el microplate para 15-30 s, después saque y agite para secarse con el papel absorbente, repita 4-5 veces. (Si hay las burbujas después de agitar, las cortó con las extremidades limpias).

6) Coloración: añada el µL 50 el µL del substrato A y entonces 50 del substrato B en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, después incube en 25 el ℃ for15min en la oscuridad para la coloración.

7) Determinación: añada 50 que el µL del para la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450nm para determinar el valor del OD de cada pozo. (Recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630nm en el plazo de 5 minutos).

 

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de AOZ.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) de AOZ se puede obtener de comparar el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.01ppb, 1,415 para 0.03ppb, 0,74 para 0.09ppb, 0,313 para 0.27ppb, 0,155 para 0.81ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 0.27ppb a 0.81ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0.03ppb a 0.09ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción se obtienen para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B0) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

 

Porcentaje del valor de la absorción =	B	el ×100%
	B0

 

Valor del OD de la media de B-the de la muestra o de la solución estándar

Valor del OD de la media de B0-the de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de la solución estándar y los valores del semilogarithm de la solución estándar de AOZ (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de AOZ en la muestra.

 

8. Precauciones

1) La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.

2) La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.

3) Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.

4) La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.

5) No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversas porciones para utilizar.

6) Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La solución estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.

7) Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.

8) La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

 

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.

 

 

Q1: ¿Cuánto tiempo tomará para que usted envíe?
A1: Generalmente naves en el plazo de 7 días laborables.

 

Q2: ¿Usted apoya OEM/ODM?
A2: puede ser apoyado. Podemos modificar para requisitos particulares según sus necesidades específicas y cantidades específicas.

 

Q3: ¿Cómo su fábrica está haciendo en términos de control de calidad?
A3: Tenemos certificación ISO9001 e ISO13485 la certificación, hasta ahora todo el proceso de producción, tenemos reglas estándar, cumplimos con el comportamiento y las leyes relevantes del gobierno.

 

Q4: ¿Garantizan al servicio post-venta?
A4: Proporcionamos el servicio post-venta técnico en línea profesional. Si el producto falla durante el experimento, podemos proporcionar
dirección una por a través del teléfono, del vídeo y de otras formas.

 

Q5: ¿Cuál es su cantidad de orden mínima?
A5: 1Kit.

 

Q6: ¿Cuál es el método de envío?
A6: Puede ser enviado por expreso (FEDEX, UPS, DHL, el ccsme, etc.) o por el aire y la tierra. Confirme por favor con nosotros antes de poner una orden.