Amantadina ELISA Kit For Chicken Pork Duck de diagnóstico 96 Wells/Kit Sensitivity 0,2 Ppb

Kit de prueba ELISA de amantadina para pollo, cerdo, pato, 96 pocillos/sensibilidad del kit, 0,2 ppb

 

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de amantadina.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente en las tiras de micropocillos.La amantadina en la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las tiras de micropocillos compiten por los anticuerpos anti-amantadina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la amantadina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtienen los residuos de Amantadina.

 

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.2ppb
Temperatura de la incubadora: 25 ℃
Tiempo de incubadora: 30min~15min

Límite de detección:
Pollo, pato 0,2 ppb

Tasa de reacción cruzada:
Amantadina 100%

Índice de recuperación:
Pollo, pato 90±25%

 

3. Componentes

 

1	Tiras de micropocillos	12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
2	Solución estándar 6× (1 ml cada una)	0ppb	0.2ppb
		0.8ppb	3.2ppb
		12,8ppb	51.2ppb
3	Conjugado enzimático	7ml	gorra roja
4	solución de trabajo de anticuerpos	7ml	gorra azul
5	Sustrato A	7ml	gorra blanca
6	SustratoB	7ml	gorra negra
7	Detener la solución	7ml	gorra amarilla
8	extractante	50ml*2	tapa transparente
9	Tampón de lavado concentrado 20×	15ml	gorra blanca
10	Solución redisolutiva concentrada 5×	10ml	gorra blanca

 

4. Materiales requeridos pero no provistos

 

1) Equipo: lector ELISA (450 nm/630 nm), homogeneizador, agitador, centrífuga, balanza: sensible a la cantidad de 0,01 g, dispositivo de secado de nitrógeno, incubadora, pipetas graduadas, impresora

2) Micropipetas: monocanal 20ml ~ 200ml, 100ml ~ 1000ml, multicanal 30～300 μl

3) Reactivos: Acetonitrilo, n-hexano.

 

5. Pretratamiento de la muestra

 

Instrucciones (los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1) Solo las puntas desechables pueden usarse para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

 

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1) Solución de extracto de muestra

6 partes de acetonitrilo + 1 parte de extractante para obtener la solución de extracto de muestra lista para usar.

2) Solución de redisolución de muestra

Use 1 parte de solución de redisolución concentrada (5X) y disuélvala con 4 partes de agua desionizada para obtener la solución de redisolución de muestra lista para usar.

Preparación de muestras

 

5.1 Preparación deMuestra de pollo, pato

1) Tome 3,0 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo de centrífuga de 50 ml;agregue 6 ml de solución de extracto de muestra, agite durante 3 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 ℃) durante 5 minutos;

2) Tome 2 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, sople para secar con nitrógeno o aire a 50 ~ 60 ℃;

3) Primero agregue 1 ml de n-hexano, luego agregue 0,5 ml de solución de redisolución de muestra, mezcle durante 30 s, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 ℃) durante 5 min, deseche el n-hexano de la capa superior;

4) Tome 50 μl de líquido de capa inferior para probar

Factor de dilución: 0,5

 

6. Procedimientos ELISA

 

6.1Instrucciones

1. Llevar los reactivos ELISA a temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de su uso.

2. Vuelva a poner los reactivos ELISA a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso

3. La reproducibilidad de ELISA en el proceso de análisis depende en gran medida de la consistencia de la placa de lavado, el funcionamiento correcto de la placa de lavado es el punto de determinación del programa ELISA

4. En todo proceso de incubación a temperatura constante, evite la exposición a la luz, selle la microplaca con la membrana protectora

 

6.2 Procedimientos de operación

1. Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de su uso;

2. Coloque las tiras de micropocillos requeridas en los marcos de placas.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, almacenada a 2-8 ℃, no congelada.

3. Preparación de la solución: diluya los 15 ml de tampón de lavado concentrado 20x con agua desionizada hasta 300 ml.

4. Numeración: numere los micropocillos de acuerdo con las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.

5. Agregue estándar/muestra: agregue 50 µL de la muestra o la solución estándar en pocillos duplicados separados, luego agregue el conjugado de enzima, 50 µL/pocillo;luego solución de trabajo de anticuerpos, 50 µL/pozo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana protectora, incubar a 25 °C durante 30 min en la oscuridad.

6. Lave la microplaca: abra con cuidado la membrana de la cubierta, vierta el líquido fuera del micropocillo;agregue 250 µL/pozo de tampón de lavado diluido, lave completamente durante 4-5 veces, 15-30 s cada vez, luego saque y agite para secar con papel absorbente. (Use una lanza sin usar para perforar la burbuja después del secado)

7. Coloración: agregue 50 µL de solución de sustrato A y luego 50 µL de solución B en cada pocillo.Mezcle suavemente agitando la placa manualmente e incube a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para la coloración.

8. Determinación: agregue 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor OD en la longitud de onda dual 450/630nm en 5 min).

 

7. Juicio de resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con la amantadina en la muestra

7.1 Determinación cualitativa
El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener comparando el valor de absorbancia promedio con los estándares.Suponga que el valor de absorbancia de la muestra uno es 0,3, la muestra dos es 1,0 y los estándares son: 0 ppb de 2,243;0,2ppb de 2,054;0,8ppb de 1,715;3,2 ppb de 1,074;12,8ppb de 0,451;51,2 ppb de 0,155.Entonces la concentración de la muestra está en el rango de 12.8ppb ~ 51.2ppb;La muestra dos es de 3,2 ppb ~ 12,8 ppb.El rango de concentración de Amantadina en las muestras se puede obtener multiplicando por la dilución correspondiente de la muestra.
 

7. 2 Análisis cuantitativo
Para calcular la concentración de las muestras, se debe hacer una curva estándar.Antes de realizar la curva estándar, se debe conocer el concepto de % de absorbancia.
Cálculo del % de absorbancia:

 

Porcentaje del valor de absorbancia =	B	×100%
	B0

 

B: el valor promedio de OD de la muestra o la solución estándar
B0: el valor promedio de OD de la solución estándar de 0 ng/mL
El estándar cero se iguala así al 100 % y los valores de absorbancia se expresan en porcentajes.Los valores calculados para los estándares se ingresan en un sistema de coordenadas en papel cuadriculado semilogarítmico contra la concentración de amantadina [ng/mL].La concentración de amantadina en ng/mL (ppb) correspondiente a la absorbancia de cada muestra se puede leer en la curva de calibración.
Un software especial para el análisis de resultados de ELISA facilitará determinaciones dobles o múltiples.Si lo necesita, por favor llame para solicitar.

 

8. Precauciones

 

1. El valor estándar de OD será bajo si la temperatura ambiente es inferior a 25 ℃ o la temperatura del reactivo y la muestra no ha vuelto a la temperatura ambiente (20-25 ℃).
2. La microplaca se seca durante el proceso de lavado, lo que estará acompañado de no linealidad de la curva estándar y mala reproducibilidad;por lo tanto, continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
3. Mezcle bien antes de agregar cualquier reactivo.
4. La solución de parada es una solución de ácido sulfúrico 2M, evite el contacto con la piel.
5. No utilice el kit más allá de la fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados del kit puede provocar cambios en la sensibilidad y los valores de detección de OD.No reemplace los reactivos en diferentes lotes de kits.
6. Almacenamiento: Conservar a 2-8°C, no congelar.Vuelva a sellar las microplacas no utilizadas en bolsas autosellantes.Los materiales estándar y los acopladores incoloros son sensibles a la luz y no pueden exponerse directamente a la luz.
7. Deseche cualquier solución de tinte cuyo color indique que la solución se ha degradado.El valor de detección (450/630nm) de la solución estándar 0 (0 ppb) es inferior a 0,5 ((A450nm<0,5)) lo que indica su desnaturalización.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 ℃.Si la temperatura es demasiado alta o demasiado baja, la sensibilidad de detección y el valor de OD cambiarán.

 

9. Conservación y fecha de caducidad

Almacenamiento: almacenar a 2-8 ℃, no congelado.
Fecha de caducidad: 12 meses;la fecha de producción está en la caja.
Nota: Si el paquete de vacío de la microplaca tiene fugas, aún es válido para usar, no afecta el resultado de la prueba, relájese para usarlo.

 

 

 

 

 

P1: ¿Cuándo se enviará?
A1: le enviaremos los productos lo antes posible dentro de los 7 días hábiles posteriores a la recepción del pago.(En caso de factores externos como la epidemia, la entrega puede retrasarse)

 

P2: ¿Es compatible con OEM/ODM?
A2: Puede admitirse, pero la cantidad específica debe ser superior a 100.000 piezas, lo cual es conveniente para productos personalizados.

 

P3: ¿Cómo le está yendo a su fábrica en términos de control de calidad?
A3: Contamos con las certificaciones ISO9001 e ISO13485 a nivel nacional.Nuestro proceso de producción se ajusta a los procedimientos estándar para garantizar una calidad óptima del producto.

 

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