Diagnóstico ELISA Kit For Chicken Pork Duck 96 Wells/Kit Sensitivity de MQCA 0,5 Ppb

Kit de prueba MQCA ELISA para pollo cerdo pato 96 pocillos/sensibilidad del kit 0,5 ppb

 

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de MQCA en la muestra.Los antígenos de acoplamiento están recubiertos previamente en las tiras de micropocillos.El MQCA en la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las tiras de micropocillos compiten por el anticuerpo anti-MQCA.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de la densidad óptica (DO) de la muestra tiene una correlación negativa con el MQCA que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de MQCA.

 

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,5 ppb
Temperatura de la incubadora: 25 ℃
Tiempo de incubadora: 30min~15min

Límite de detección:
Tejido 1 ppb

Tasa de reacción cruzada:
MQCA 100%
Olaquindox <0,1%
Índice de recuperación:
Tejido 85%±10%

 

3. Componentes

 

1	Tiras de micropocillos	12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
2	Solución estándar 6× (1 ml cada una)	0 partes por billón	0,5 ppb
		1,5 partes por billón	4,5 partes por billón
		13,5 partes por billón	40,5 partes por billón
3	Conjugado enzimático concentrado	1ml	gorra roja
4	solución de trabajo de anticuerpos	8ml	gorra azul
5	Sustrato A	7ml	gorra blanca
6	SustratoB	7ml	gorra negra
7	Detener la solución	7ml	gorra amarilla
8	Solución redisolutiva	50ml	tapa transparente
9	Tampón de lavado concentrado 20×	40ml	gorra blanca

 

4. Materiales requeridos pero no provistos

1) Equipos: lector de microplacas (450 nm / 630 nm), homogeneizador, oscilador, centrífuga, pipetas de medición, dispositivo de secado de nitrógeno y balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), Incubadora.
2) Micropipetas: monocanal de 20 a 200 µL y de 100 a 1000 µL y multicanal de 30～300 µl;
3) Reactivos: Acetato de etilo, n-hexano, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Pretratamiento de la muestra

Instrucciones
Los siguientes puntos deben ser tratados antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra:
1) Solo las puntas desechables pueden usarse para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
2) Antes del experimento, cada utensilio experimental debe ser revisado para estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

preparación de la muestra
1) Extracto de muestra (Almacenar a 2~8 ℃ durante 1 mes): Tome 8,6 ml de HCl concentrado, agregue agua desionizada a 500 ml, luego agregue 10 g de NaCl para obtener el extracto de muestra.

5.1 Tejido de ganado y aves de corral (pollo, pato, cerdo):
1. Tome 2± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo de centrífuga de 50 ml;
2. Agregue 4 ml de extracto de muestra, agite bien durante 1 minuto;
3. Agregue 4 ml de acetato de etilo y 2 ml de CH3CN, agite bien durante 10 s;Centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 ℃) durante 10 min (Nota: este paso solo necesita agitarse durante 10 s, agitar demasiado tiempo conducirá a la emulsificación, si aparece emulsificación, tome cierto sobrenadante, luego agite el tubo ligeramente durante 5 s , centrifugar de nuevo para obtener suficiente sobrenadante);
4. Tome 3 mL de la fase orgánica de la capa superior en un recipiente transparente, debajo para secar con nitrógeno o aire a
baño de agua de 56 ℃;
5. Agregue 1 ml de N-hexano, agite durante 30 s, luego agregue 0,5 ml de solución Redissolvente, agite y mezcle bien durante 30 s;centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante 5 min.
6. Retire la fase orgánica de la capa superior. Tome 50 µL de la capa inferior para su análisis.
Veces de dilución de la muestra: 0,5

 

6. Procedimientos ELISA

6.1 Instrucciones
1) Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de usarlos;
2) Regrese todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso;
3) La reproducibilidad del análisis ELISA, en gran medida, depende de la consistencia del lavado de las placas.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
4) Para la incubación a temperatura constante, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz, y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de operación
1) Saque todos los reactivos necesarios y colóquelos a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos.Tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para mezclar uniformemente antes de su uso;
2) Tome las tiras de micropocillos y los marcos de placas necesarios.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, almacenada a 2-8 ℃;
3) Preparación de la solución: diluir 40 mL del tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada), o preparar según la cantidad necesaria;
4) Numeración: numerar los micropocillos según muestras y solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones;
5) Prepare una solución de mezcla de solución de trabajo de anticuerpo y conjugado de enzima concentrada: mezcle la solución de trabajo de anticuerpo y el conjugado de enzima concentrada a razón de 10:1 uniformemente (1000 ul de solución de trabajo de anticuerpo + 100 ul de conjugado de enzima concentrada, esta solución de mezcla debe usarse una vez preparada, no puede ser almacenado, la cantidad del paquete tiene una cantidad extra, preparar como proporción está bien.)
6) Agregue 20 µL de la muestra o solución estándar para separar los pozos duplicados, luego agregue 70 µL de solución de mezcla de solución de trabajo de anticuerpos y conjugado de enzima concentrada en cada pozo.Mezcle agitando suavemente, selle la microplaca con la membrana protectora e incube a 25 ℃ en la oscuridad durante 30 min;
7) Lave la microplaca con el tampón de lavado a 250 µL/pocillo de cuatro a cinco veces;empapar el pocillo con el tampón de lavado durante 15-30 seg, despegar para secar con papel absorbente (si quedan burbujas después del despegue, cortarlas con las puntas limpias);
8) Coloración: agregue 50 µL de la solución de sustrato A y 50 µL de la solución B en cada pocillo.Mezcle agitando suavemente e incube a 25 ℃ durante 15 min en la oscuridad para la coloración;
9) Determinación: agregue 50 µL de solución de parada en cada pocillo.Mezclar agitando suavemente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD.(se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 min).

 

7. Juicio de resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de MQCA.

7.1 Determinación cualitativa
El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de la DO de la muestra Ⅰ es 0,3 y el de la muestra Ⅱ es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar son los siguientes: 2,043 para 0 ppb, 1,716 para 0,5 ppb, 1,215 para 1,5 ppb, 0,74 para 4,5 ppb, 0,313 para 13,5 ppb y 0,155 para 40,5 ppb, por lo que el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 13,5 a 40,5 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 1,5 a 4,5 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa
Los valores medios de los valores de absorbancia equivalen al porcentaje del valor promedio de OD (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor de OD (B0) de la primera solución estándar (0 estándar) y luego multiplicado por 100% , eso es,

 

Porcentaje del valor de absorbancia =	B	×100%
	B0

 

 

B: el valor promedio de OD (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar
B0: el valor promedio de OD de la solución estándar de 0 ng/mL
Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de MQCA (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el pliegue de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de MQCA en la muestra.
Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software)

 

8. Precauciones

1. La temperatura ambiente por debajo de 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no regresan a la temperatura ambiente (20-25 ℃) conducirá a un valor de OD estándar más bajo
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen las curvas estándar no lineales y la reproducibilidad no deseada.
3. Mezcle todos los reactivos y la mezcla de reacción de manera uniforme y lave bien la microplaca; de lo contrario, se producirá una reproducibilidad no deseada.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel;
5. Coloque la microplaca sin usar en una bolsa con cierre automático para volver a cerrarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
6. No utilice el kit después de su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de OD.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote para usar
7. Deseche la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 de menos de 0,5 indica su degeneración
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 ℃, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

 

9. Conservación y fecha de caducidad

Almacenamiento: almacenar a 2-8 ℃, no congelado.
Fecha de caducidad: 12 meses;la fecha de producción está en la caja.
Nota: Si el paquete de vacío de la microplaca tiene fugas, aún es válido para usar, no afecta el resultado de la prueba, relájese para usarlo.

 

 

 

 

 

P1: ¿Cuándo se enviará?
A1: le enviaremos los productos lo antes posible dentro de los 7 días hábiles posteriores a la recepción del pago.(En caso de factores externos como la epidemia, la entrega puede retrasarse)

 

P2: ¿Es compatible con OEM/ODM?
A2: Puede admitirse, pero la cantidad específica debe ser superior a 100.000 piezas, lo cual es conveniente para productos personalizados.

 

P3: ¿Cómo le está yendo a su fábrica en términos de control de calidad?
A3: Contamos con las certificaciones ISO9001 e ISO13485 a nivel nacional.Nuestro proceso de producción se ajusta a los procedimientos estándar para garantizar una calidad óptima del producto.

 

P4: ¿Cómo proporcionar servicio postventa?
A4: Brindamos un servicio posventa técnico profesional en línea.Podemos brindarle orientación personalizada a través de video, teléfono, etc.

 

P5: ¿Cuál es el método de pago?
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Q6: ¿Cómo enviar?
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